Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui hasil pengembangan serta kelayakan asesmen Biologi berbasis keterampilan berpikir kritis. Penelitian ini merupakan penelitian dan pengembangan. Produk yang akan dikembangkan berupa asesmen Biologi berbasis keterampilan berpikir kritis. Pengembangan yang dilakukan menggunakan model pengembangan dari adaptasi McIntire dalam Mulyatiningsih Instrumen pengumpulan data yang digunakan berupa wawancara, kuesioner, soal essay berpikir kritis dan lembar observasi. Validasi ahli dilakukan oleh 2 validator ahli : 1) ahli materi; dan 2) ahli evaluasi KBK. Teknik analisis data menggunakan analisis kualitatif dengan menggunakan statistik Aiken’sV dan analisis kuantitatif dengan menggunakan program SPSS versi 16 dan Microsoft Excel. Hasil penelitian ini berupa asesmen Biologi berbasis keterampilan berpikir kritis berbentuk essay dengan materi kelas XI semester ganjil dan menghasilkan produk akhir yaitu soal dari hasil uji coba ke-1 dan ke-2 yang berjumlah 24 butir soal. Kelayakan asesmen Biologi berbasis keterampilan berpikir kritis berdasarkan validator ahli hasilnya berkualifikasi cukup sampai sangat tinggi serta berdasarkan hasil validitas empiris butir soal dinyatakan pada uji coba ke-1 valid dengan 28 soal, pada uji coba ke-2 valid dengan 24 soal, untuk nilai reliabel uji coba ke-1 terkategori bagus sekali dengan nilai 0,875, pada uji coba ke-2 terkategori cukup dengan nilai 0,764. Hasil uji tingkat kesukaran pada uji coba ke-1 butir soal rata-rata terkategori sukar dengan nilai 0,332 dan uji coba ke-2 soal terkategori sedang dengan nilai 0,537, kemudian untuk uji daya pembeda soal pada uji coba ke-1 terkategori baik sekali dengan nilai 1,541 dan untuk uji coba ke-2 butir soal rata-rata terkategori baik sekali juga dengan nilai 2,021.